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2×Hiper HotStart PCR Genotyping Mix(含染料)是即用型的PCR预混合溶液，主要应用于小鼠基因型鉴定。

本制品含有Hiper HotStart Taq DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化了实验的操作步骤，可以高通量操作并提高实验结果的重现性。

Hiper HotStart Taq DNA Polymerase是经过配体修饰的热稳定Taq DNA Polymerase，该配体可以随温度变化来调节DNA聚合酶活性。在室温下酶活性被完全封闭，经95℃加热后活性才被释放。Hiper HotStart DNA Polymerase的激活时间只需要2～3min，兼容现有的PCR程序。本制品防止了在样品准备及反应升温阶段产生非特异扩增，可以有效地进行基因分型实验。

• 核酸外切酶残留检测：20μL本品和0.6μg λDNA -HindIII，37℃下孵育4h，DNA的电泳谱带无变化。
  
• 核酸内切酶残留检测：20μL本品和1μg λDNA，37℃温育4h，DNA的电泳谱带无变化。
  
• 大肠杆菌残留DNA检测:50μL体系中，加入25μL本品，以无菌ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。30个循环后扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。

• PCR反应体系

  成分	用量	终浓度
  ddH2O	至50μL	-
  模板DNA	适量	-
  Primer正向(10μM)	2μL	0.4μM
  Primer反向(10μM)	2μL	0.4μM
  2×Hiper HotStart PCR Genotyping Mix(含染料)	25μL	1×

  注：
  
  • 针对不同模板的最佳反应浓度有所不同，下表为50μL反应体系推荐模板使用量，仅供参考。

    模板类型	用量
    基因组DNA	50ng～100ng
    质粒DNA	100pg～20ng
    cDNA	1～5μL (不超过反应体系的1/10)

  
  
• PCR扩增程序

  步骤	温度	时间	循环数
  预变性	95℃	5min	1
  变性	95℃	30sec	35
  退火	50～60℃	30sec
  延伸	72℃	30sec/kb
  终延伸	72℃	10min	1

  
  注：
  
  • 退火温度和时间：退火温度推荐使用50～60℃。退火时间推荐设置为30sec，可以在20～30sec内调节。可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度和时间。
    
  • 延伸温度和时间：温度推荐使用72℃。时间推荐使用30～60sec/kb。
    
  • 扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止DNA发生降解。